细胞凋亡检测--Moxi GO II快速流式细胞仪
细胞凋亡（Apoptosis）是一个由多基因严格控制，高度调节的细胞死亡过程，是细胞程序性死亡（Programmed cell death）的一种，是组织内细胞状态维持的主要生物学机制。作为一种基本的生物学现象，细胞凋亡不会触发免疫反应，它是为了更好的适应生存环境而主动争取的一种有序的死亡过程，在生物体的进化、内环境的稳定以及多个系统的发育中起着重要作用。凋亡过程的紊乱，可能与许多疾病的发生有关。研究者对细胞凋亡进行研究，对疾病机制的阐明，疾病疗法的探索以及治疗药物的研究方面都有着重要意义。
细胞凋亡的变化是多阶段的，包括一系列的细胞形态学和生物化学的改变。检测细胞凋亡的方法也有很多，如显微镜下的形态学观察，DNA的琼脂糖凝胶电泳等。其中流式细胞术是很常用的一种手段。而流式细胞术检测细胞凋亡的方法也有很多，其中又以Annexin V/PI双染色法最为重要。
• Annexin V/PI双染色法
细胞凋亡时，位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS）翻转至细胞膜外侧。Annexin V（膜联蛋白-V）是一种对PS高度亲和的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能特异性识别凋亡细胞表面的PS。所以可以用FITC偶联Annexin V作为探针，鉴别凋亡细胞和活细胞（如图1左）。
图1. Annexin V/PI染色
坏死细胞的PS也会由细胞膜内侧翻转到细胞膜外侧，Annexin V也能与之结合，所以Annexin V无法区分坏死细胞和凋亡细胞。PI作为一种核酸染料，能够与细胞内的DNA结合，但它不能通过完整的细胞膜，故PI可以标记坏死细胞（如图1右），从而将活细胞和坏死细胞区分开来。将Annexin V和PI同时使用，利用流式细胞仪就可以明确区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞，并可以定量分析各自所占比例。
• Moxi GO II快速流式细胞仪
传统流式细胞仪设备体积大，构造复杂，价格昂贵，通常作为平台产品仪器使用。仪器操作复杂，维护繁琐，对操作者要求较高，往往需要进行专业操作培训，具备专业知识技术才能使用。同时平台产品排队周期长，限制了科研人员的使用。
图2. Mxoi GO II
针对这种情况，美国Orflo Technologies公司将行业公认的细胞计数和大小测量金标准——库尔特原理（Coulter Principle）与荧光流式检测技术相结合，推出的新一代快速流式细胞仪——Moxi GO II，满足了研究人员对细胞凋亡检测的需求。
• 应用展示
喜树碱是一种细胞凋亡诱导剂，Jurkat细胞在20mM喜树碱中预处理4个小时，然后与50%热杀细胞（坏死细胞）混合，用Moxi GO II进行细胞凋亡检测，其输出结果如图2所示，散点图中细胞分群清晰。除散点图外，Moxi GO II还以表格和柱状图展示象限门控数据，为用户进行数据解析提供了极大的便利。
图2. 细胞凋亡结果输出
Moxi GO II系统还内置对比功能，可快速叠加比较两种检测结果。如图3所示，用喜树碱处理Jurkat细胞，分别处理0小时（t=0）和6.5小时（t=6.5）后进行Annexin V-FITC荧光检测，并将两次检测的散点图结果及荧光直方图结果叠加比较。
图3. 两种检测结果对比输出
图3直观的显示出经过6.5小时处理后，Annexin V+的细胞百分比显著增加，细胞平均大小相应减少。这是细胞凋亡的显著特征。通过库尔特原理对细胞进行大小测定，这种对细胞大小变化的区分在传统流式细胞仪上是无法实现的。
近日，武汉某生物技术服务公司将293T细胞进行药物处理后，分别用Moxi GO II系统和传统台式流式细胞仪CytoFLEX S对细胞凋亡情况进行检测评估（图4和图5），经对比后发现，两个系统由于上样体系、检测原理等差异，散点图展示有所不同，但数据分析结果一致（红色框选）：细胞状态良好，与对照组相比，实验组凋亡率并无明显差异。
|
图4 |
图5 |
客户评价：Moxi GO II系统对细胞分群明确，561nm/LP通道补偿调节合适。在采用646nm/LP通道进行PI检测时，无需进行补偿调节，检测结果与传统流式细胞仪基本一致。整个仪器预设检测应用，直接调用即可，操作非常简单，散点图及相应数据结果在几秒内即可得出，无需再次软件分析，使用便利，适合单个实验室使用。
Moxi GO II采用库尔特原理进行细胞计数和粒径测量，同时采用488nm激光光源，结合两个PMT通道，525/45nm通道和561nm/LP（或者646nm/LP，可根据需要更换），进行细胞活率、细胞凋亡、转染效率、活性氧簇、线粒体膜电位等常规流式检测。
仪器设计小巧轻便，无需预热，开机即用，预设程序，触屏操控，运行后10秒即可给出测试结果，使用后也无需清洁维护。Moxi GO II功能多样，简单易用，为广大研究者提供了一个非常实用的检测工具。通过Moxi GO II，无论是经验丰富的流式专家，还是初试身手的实验小白，都可以轻松完成实验。
美国Orflo Technologies公司是一家非常专业的细胞分析仪器研发和制造企业，拥有多项专利技术，产品以库尔特原理的高精细胞计数仪和超快流式细胞仪为主。作为中国地区独家代理，环亚生物科技有限公司全权负责Orflo Technologies产品在中国地区的推广、销售，为广大用户提供专业的技术咨询和产品服务。
环亚生物，生命科学产品全国性代理商，不断把国外顶级的创新产品引入中国。环亚生物具备完善的公司运营、产品管理、营销、售前技术支持和售后维修体系。
▼更多 Orflo产品 详情，请联系我们▼
环亚生物科技有限公司
地址：上海市闵行区友东路358号闵欣大厦1号楼701/703/705室
电话：021-54583565
邮箱：info@apgbio.com
网址：www.apgbio.com
▼更多精彩内容，请扫码关注我们▼
